Martes, 13 Junio 2017 18:58

Protocolos de muestras de sangre

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SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE HEMOCULTIVO

Describir la técnica de siembra primaria de hemocultivo para el aislamiento de bacterias causantes de infecciones del torrente sanguíneo. 

Materiales y equipos

a) Estufa de 35–37 °C.

b) Mechero Bunsen o Cabina de flujo laminar.

c) Jeringa estéril.

d) Guantes de látex.

e) Alcohol al 70%.

f) Contenedor de material contaminado.

g) Medios de cultivo:

– Medio bifásico Ruiz Castañeda o monofásico.

– Agar sangre de carnero (AS).

– Agar Mc Conkey (McC).

– Se puede incluir otros medios (ejm. Manitol salado).

Procedimiento

a) Incubar el frasco de hemocultivo a 35-37 °C hasta por 7 días.

b) Bañar la superficie de agar con el caldo inclinando el frasco suavemente.

c) Examinar visualmente y con luz transmitida los frascos de hemocultivo después de 12 y 24 horas de incubación.

d) La observación de turbidez o lisis de los glóbulos rojos es indicativa de crecimiento bacteriano; entonces se realiza una coloración Gram y un subcultivo. En los medios bifásicos el desarrollo también se puede evidenciar en la fase sólida mediante la formación de colonias.

e) Si no se observa lisis de los glóbulos rojos o turbidez en el caldo, o colonias en la fase sólida, continuar observando todos los días para ver si aparecen signos de crecimiento, hasta siete días después de haber iniciado el procedimiento.

Subcultivo

a) Los subcultivos deben realizarse en cabina o cerca de un mechero de Bunsen.

b) Realizar subcultivos ciegos dentro de las 12 y 24 horas de incubación.

c) Para realizar los subcultivos desinfectar la superficie de la tapa del frasco con alcohol al 70%.

d) Con una jeringa estéril, extraer a través del tapón de jebe la muestra de sangre.

e) Inocular una gota de muestra del hemocultivo en un extremo de la superficie de las placas de agar sangre, agar Mac Conkey y colocar cuidadosamente una gota sobre una lámina portaobjetos para hacer un frotis y coloración Gram.

f) Utilizando el asa de siembra y tomando como referencia central el inoculo de la muestra, realizar la siembra por dispersión agotamiento en los cuatro cuadrantes de la placa, con el propósito de obtener colonias aisladas.

g) Incubar las placas de AS y agar McC a 35 – 37 °C por 24 horas.

h) Observar la lámina coloreada y buscar la presencia de bacterias.

i) Si no hay crecimiento a las 24 horas seguir incubando hasta por 48 horas.

j) Si no hubiera desarrollo bacteriano, repetir el procedimiento al 5° y 7° día.

Nota: Se recomienda usar una jeringa de tuberculina.

Lectura de subcultivos

a) A las 24 horas observar el crecimiento de colonias. Si no se observa desarrollo, incubar 24 horas más.

b) Cuando se ha confirmado crecimiento bacteriano por subcultivo, se puede descartar el frasco de hemocultivo siguiendo los procedimientos de bioseguridad.

c) En algunos casos el frasco de hemocultivo debe ser retenido para mayor estudio.

d) En la interpretación de los resultados deben considerarse los datos clínicos individuales. Staphylococcus coagulasa negativo, corinebacterias y especies de Bacillus son contaminantes frecuentes y a menudo se aislan en sólo una de tres muestras. Si no hay leucocitos y el paciente no tiene factores de riesgo para bacteremia por estos gérmenes como inmunosupresión, prótesis, líneas de acceso vascular e historia de adicción a drogas intravenosas se puede concluir que la presencia de estos gérmenes se debe a contaminación.

e) Se informará el resultado de cada frasco de hemocultivo individualmente.

Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005.

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