Muestra de lavado broncoalveolar 

Durante el lavado broncoalveolar se puede colectar hasta 100 mL de fluido. Una porción de esta muestra es transportada al laboratorio. 

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0,001 mL ó 0,01 ó tip estéril (10 – 100 μL) y micropipeta. 

b) Estufa de 35 – 37 °C. 

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar. 

d) Guantes de látex. 

e) Contenedor de material contaminado. 

f) Mascarilla. 

Medios de cultivo 

– Agar sangre de carnero (AS). 

– Agar Mc Conkey (McC). 

– Pueden incluirse otros medios (ejm. Manitol salado, agar cetrimide, etc.) 

Procedimiento 

Cultivo

a) Tomar una alícuota de 0,001 mL ó 0,01 mL con una asa calibrada o una micropipeta con tips estériles sembrar en los medios de cultivo. Proceder de la misma manera como fue descrita para el cultivo de orina. 

b) Concluida la siembra, cerrar la placa y colocarla con la parte que tiene el medio de cultivo hacia arriba. 

c) Incubar las placas a 35 – 37 °C por 24 – 48 horas. 

Lectura a las 24 horas 

Si hubiera crecimiento bacteriano, realizar el recuento de colonias; si no hubiera crecimiento, incubar por 24 horas más. 

Interpretación 

La recuperación de mayor o igual a 10 000 UFC de un organismo específico por ml de fluido se correlaciona con neumonía. 

Frotis 

a) Inmediatamente después de sembrar la muestra, centrifugar la muestra restante y decantar el sobrenadante. 

b) Hacer un frotis del sedimento. 

c) Colorear por el método de Gram y realizar la lectura. 

Interpretación 

a) El reporte de coloración Gram debe incluir una observación referente a la presencia o ausencia de organismos intracelulares. 

b) La observación de más del 7% de células conteniendo organismos intracelulares se correlaciona con neumonía asociada a ventilador mecánico.

Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005.

Muestra de cepillado bronquial

Una muestra de cepillado bronquial contiene aproximadamente 0,01 mL a 0,001 mL de secreción. Esta se coloca en 1 mL de suero fisiológico o caldo TSB o BHI y se transporta inmediatamente al laboratorio.

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0.01 mL o tip estéril (10 – 100μL) y micropipeta

b) Estufa de 35 – 37 °C

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar.

d) Guantes de látex.

e) Mascarilla.

f) Contenedor de material contaminado.

Medios de cultivo

– Agar sangre de carnero (AS)

– Agar Mc Conkey (McC)

– Pueden incluirse otros medios (ej. Manitol salado, agar cetrimide, etc.)

Procedimiento

Cultivo

a) Homogeneizar en un vórtex.

b) Tomar 0,01 mL de la muestra utilizando un asa calibrada o una micropipeta con tip estéril, sembrar en las placas con los medios de cultivo de acuerdo al método que consiste en inocular en el centro de la placa a partir del cual se extiende la muestra, hacia delante y hacia atrás. Luego, sin quemar el asa, el inóculo se disemina uniformemente con trazos perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa.

c) Concluida la siembra, cerrar la placa y colocarla con la parte que tiene el medio de cultivo hacia arriba.

d) Incubar las placas con los medios a 35 – 37 °C por 24 – 48 horas.

Lectura a las 24 horas

Si hubiera crecimiento, realizar el recuento de colonias, si no, incubar por 24 horas más.

Interpretación

Un recuento de más de 1000 UFC / mL de caldo o suero fisiológico (correspondientes a 106 UFC / mL de la muestra original) puede correlacionarse con infección.

Frotis

a) Inmediatamente después de la siembra, centrifugar la muestra restante.

b) Hacer un frotis del sedimento según los procedimientos señalados en el aspirado transtraqueal.

c) Colorear por el método de Gram y realizar la lectura.

Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005.

Cultivo de aspirado transtraqueal

Materiales y equipos

a) Estufa de 35 – 37 °C

b) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar.

c) Guantes de látex.

d) Mascarilla.

e) Contenedor de material contaminado.

Medios de cultivo:

– Agar sangre de carnero (AS).

– Agar Mc Conkey (McC).

– Pueden incluirse otros medios (ejm. Manitol salado, agar cetrimide, etc.)

Procedimiento

Cultivo

a) Seleccionar la porción de la muestra más purulenta o que contenga sangre.

b) Utilizando un hisopo estéril o una pipeta pasteur, inocular la muestra en un extremo de la superficie de las placas con los medios de cultivo.

c) Utilizando el asa de siembra y tomando como referencia central el inoculo de la muestra, realizar la siembra por dispersión agotamiento en cuatro cuadrantes de la placa, con el propósito de obtener colonias aisladas (Figura 3).

d) Incubar las placas con los medios de cultivo a 35 – 37 °C por 24 a 48 horas.

e) Si no hay crecimiento a las 24 horas seguir incubando hasta por 48 horas.

Frotis:

a) Seleccionar la porción más purulenta de la muestra que contenga sangre.

b) Suavemente extenderla en la lámina portaobjetos.

c) Dejar secar el frotis al aire, de preferencia dentro de una cabina de flujo laminar.

d) Fijar con metanol y colorearlo por Gram.

e) Bajo el aumento 10x examinar el frotis y determinar presencia de polimorfonucleares y células escamosas.

Lectura a las 24 horas

Si no hubiera crecimiento, incubar por 24 horas más.

Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005.

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DEL TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR

Describir los procedimientos de cultivos de muestra de tracto respiratorio inferior: aspirado transtraqueal, lavado y cepillado broncoalveolar. 

Las muestras del tracto respiratorio inferior se deben enviar inmediatamente al laboratorio, de ocurrir algún retraso, la muestra puede mantenerse refrigerada a 4 °C. 

Cultivos cuantitativos:

Muestra de cepillado bronquial, y lavado broncoalveolar

Se recomienda que el fluido de lavado broncoalveolar y cepillado bronquial de pacientes con posible neumonía asociada a ventilador mecánico se cultiven cuantitativamente para evaluar en forma óptima la significancia del organismo recuperado. 

Cultivo de aspirado transtraqueal

Muestra de cepillado bronquial

Muestra de lavado broncoalveolar

Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005.

Publicado en Protocolos

OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE SECRECIONES DEL TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR

Describir el procedimiento de obtención de muestras de secreciones del tracto respiratorio inferior para realizar el diagnóstico microbiológico mediante cultivos.

Condiciones Específicas

Las muestras de lavado broncoalveolar, cepillado bronquial o aspirado transtraqueal deben ser obtenidas por un profesional especializado siguiendo los procedimientos normativos de su institución.

Materiales

a) Recipiente estéril o tubo estéril.

b) Tubo estéril con 1 mL de suero fisiológico estéril o caldo tripticasa soya.

Procedimiento

a) Colocar el aspirado transtraqueal o lavado broncoalveolar en un recipiente estéril (mínimo 1 mL de muestra) y el cepillo en un tubo con 1 mL de solución salina estéril, caldo tripticasa soya o infusión cerebro – corazón.

b) Para el análisis cuantitativo de lavado broncoalveolar se debe transportar un volumen mínimo de 1 mL (en el proceso generalmente se obtiene de 40 mL a 80 mL de fluido).

c) Para el análisis cuantitativo de la muestra obtenida por cepillo, ésta se debe colocar en 1 mL de caldo tripticasa soya o suero fisiológico y transportarla inmediatamente al laboratorio.

d) De no ser así, éstas se pueden mantener en las condiciones arriba mencionadas, hasta por dos horas a temperatura ambiente (15 a 30 minutos para volúmenes pequeños) ó 24 horas en refrigeración a 4 °C.

Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005.

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